十二味系列化妆品皮肤刺激性及过敏性试验研究

　　【摘要】目的对十二味系列化妆品皮肤刺激性和致敏性进行动物试验观察。方法以家兔为模型进行多次给药皮肤刺激试验，以豚鼠为模型进行皮肤致敏作用试验。结果十二味系列化妆品对家兔皮肤未见任何刺激作用，也不引起豚鼠出现过敏反应。结论十二味系列化妆品是一类安全性较好的化妆品。

　　【关键词】十二味系列化妆品刺激性过敏性

　　中药化妆品的历史可追溯到二千年前，如《神农本草经》载有“白芷，长肌肤润泽，可作面脂。”历代中医书籍中，中药化妆品常单列章节，如《外台秘要》在卷第32中，专设“面部面脂药头膏发鬓衣香澡豆等34门”；《普济方》在第52卷设有“泽面”、“面膏”、“澡豆”等节，在第268卷设有“制脂粉法”1节。隋代还曾出现中药化妆品专著《妆台方》。据有关专家统计，历代的美容配方多达两千余个。

　　十二味系列化妆品是以中医药理论为指导，并根据各种中药材的不同特性开发多种剂型的系列化妆品，包括三七活肤、滇竹祛痘、丹参无暇、雪茯苓美白、甘草舒缓等系列。我们依照化妆品卫生规范（2007年版）[1]的要求，对十二味系列化妆品中的多个品种进行了皮肤刺激和致敏试验，为这类产品的安全性提供试验依据。

　　1试验材料

　　1.1供试品

　　十二味甘草舒缓按摩乳，十二味雪茯苓美白日霜，十二味雪茯苓美白晚霜，十二味三七活肤面乳，本公司实验室生产。

　　1.2试验动物

　　新西兰大耳白兔（1.8～2.3kg），普通级豚鼠（250g～300g），由昆明医学院实验动物中心提供。

　　2试验方法

　　2.1动物分组

　　2.1.1将新西兰大耳白兔随机分为四组，分别为十二味甘草舒缓按摩乳、十二味雪茯苓美白日霜、十二味雪茯苓美白晚霜、十二味三七活肤面乳组，每组动物4只，雌、雄各2只。

　　2.1.2将豚鼠随机分为六组，受试物每组20只，阴性和阳性对照组每组10只。分别为十二味甘草舒缓按摩乳组、十二味雪茯苓美白日霜组、十二味雪茯苓美白晚霜组、十二味三七活肤面乳组、阴性对照组和阳性对照组。

　　2.2皮肤刺激性试验[1，2，3]

　　2.2.1试验前24h采用电动剃头器及脱毛剂（5%硫化钠）将家兔脊柱两侧去毛，去毛区面积约为3cm×3cm，24h后选择皮肤健康完整无损的动物进行试验，涂抹面积2.5cm×2.5cm。试验采用同体左右自身对比，左侧去毛区涂抹受试物0.5g（ml），右侧去毛区涂以等量赋形剂，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。贴敷时间4小时，贴敷结束后，除去受试物并用温水清洁给药部位。每日涂抹受试物一次，连续涂抹14天，从第二天开始，每次涂抹前剪毛。

　　2.2.2疗效评价在每次去除受试物1小时后观察涂抹部位皮肤反应。按卫生部《化妆品卫生规范》2007年版皮肤刺激反应评分标准进行评分，计算每天每只动物平均积分，按皮肤刺激强度分级标准判定皮肤刺激强度。

　　2.3皮肤过敏性试验[1，2，4]

　　采用局部封闭涂皮法（BuehlerTest，BT）进行皮肤致敏性试验。

　　2.3.1诱导接触于给受试物前24小时将动物背部脊柱左侧毛脱掉，脱毛范围3cm×3cm。实验第零天取受试物0.2g涂在受试豚鼠左侧脱毛区，用2层纱布和1层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定，持续6h。第7和第14天以同样方法各重复1次。阴性对照组不予诱导接触，阳性对照组左侧脱毛区给予阳性对照物0.2g（1%的2，4-二硝基氯代苯），接触方法同上。

　　2.3.2激发接触于第28天激发接触，采用与诱导接触相同的方法处理豚鼠右侧脱毛区，6h后去掉受试物。阴性对照组右侧脱毛区给予0.2g受试物，阳性对照组右侧脱毛区给予阳性对照物0.2g（0.1%的2，4-二硝基氯代苯），激发接触方法皆同上。

　　2.3.3评价指标激发接触后24小时、48小时观察皮肤红斑、水肿和其他异常反应情况，按卫生部《化妆品卫生规范》2007年版变态反应试验皮肤反应评分标准评分，当受试物组动物出现皮肤反应积分≥2时，判为该动物出现皮肤变态反应阳性；按致敏强度标准判定受试物的致敏强度，并计算致敏率（致敏率：皮肤红斑或水肿的动物数/受试物总数）。

　　3结果

　　多次给药皮肤刺激试验结果显示，十二味系列化妆品及赋形剂多次涂抹于家兔完整皮肤及停药72h内，除十二味甘草舒缓按摩乳组有一只家兔第3、4天给药后左边（涂化妆品）出现轻度红斑，次日涂药前观察已消失；另一只家兔第3天给药后右边（涂基质）出现轻度红斑，次日涂药前观察消失；其余各组均未发现涂药部位有红斑、水肿、出血点、色素沉着以及皮肤粗糙或皮肤菲薄等现象。受试物及赋形剂皮肤刺激反应的积分均值均小于0.5，皮肤刺激性强度评价均为无刺激性。（结果见表1）

　　皮肤过敏性试验结果显示，阳性药组动物皮肤受试区自激发给药6h后出现明显红斑，24小时红斑依然明显，48小时渐消退，72小时后部分动物可见红斑，致敏率为100%。其余各组动物皮肤受试区自激发给药6至72h未出现异常反应，由此可见受试样品不产生致敏作用。（结果见表2）

　　4讨论

　　化妆品是每天使用于皮肤上的产品，因此它的安全性是最重要的问题。十二味系列化妆品主要利用三七中提取的三七总皂苷、三七多糖、三七氨基酸，以及川芎、侧柏、苦参、薏苡仁等中药经科学组方、提取有效成份后制成的中药系列化妆品，该系列化妆品于2008年获得“中国化妆品行业十大影响力品牌”称号。因受条件所限，本试验仅采用了十二味系列化妆品中的4个产品进行试验，4个产品对家兔14天多次皮肤刺激试验结果为无刺激性；对豚鼠无皮肤致敏性，属于安全的化妆品。在后续的研究中我们将加大样本量，在更广泛的范围内对该系列化妆品的安全性进行研究，为其应用提供试验依据。

　　参考文献

　　[1]卫生部监督局，化妆品卫生规范[s].2007。

　　[2]谢荣增，仝宝生等；苦豆豆抑菌洁面液皮肤刺激和皮肤过敏实验研究[J]；中国中医药咨讯；2011；3（22）：3-4

　　[3]廖秀萍，田辉，张敏等；羊胎素保湿润肤霜皮肤刺激性实验研究[J]；湖北中医杂志；2011；33（12）：76

　　[4]张子伯，刘巍，任京杰等；一种天然化妆品对豚鼠的皮肤致敏性试验[J]；毒理学杂志；2OO6；20（3）：197-198

　　作者简介：黄元丽（1975～），女，汉族，工程师、执业药师；长期从事新药药理及相关研究。

　　文/黄元丽