中药川芎和赤芍配伍规律的方法研究

　　【摘要】目的：分析与探讨中药川芎与赤芍配伍规律。方法：使用HPLC-MS法对川芎与赤芍配伍中的各种化学成分进行研究，以了解上述两种中药进行配伍应用时的规律。建立稳定、可靠、重复性高的HPLC法用于分离，再对所得色谱图进行数据处理，以了解单煎液与合煎液的成分变化。结果：通过对色谱图进行分析可得，川芎与赤芍配伍后，图谱上有新峰产生，并伴有含量变化。结论：川芎与赤芍配伍后能够产生新的化合物，且各自的药用成分的含量也会发生改变，说明配伍使用时对于治疗疾病具有新的意义。

　　【关键词】川芎；赤芍；HPLC-MS

　　中药配伍使用是临床上常用的一种治疗疾病的方法，大多数中药通过复方配伍后，能够取得独特的疗效[1]。高效液相色谱法串联质谱法（HPLC-MS）是具备多模式、高灵敏度、高准确性、高精密度的方法[2]，在药学检验中常用于分析多组分的含量与结构。川芎是一种用于活血行气、祛风止痛的中药材，而赤芍则是用于消肿止痛、凉血行淤的中药材，根据相关研究显示，川芎与赤芍在多个药方中均有配伍使用的记载，且能够获得特殊的功效。因此本文就HPLC-MS对于川芎与赤芍配伍后化学成分的变化进行研究与分析，以了解川芎与赤芍配伍使用从而获得特殊疗效的机制，具体报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料与样品制备方法

　　本文所选用的赤芍与川芎药材均为四川省人民医院提供，所有药材均通过中国中药研究所鉴定，为符合实验要求的药材。甲醇为色谱纯（上海安谱科学仪器有限公司），乙腈与乙酸为色谱纯（美国TEDIA公司），超纯水为德国Sartorius公司生产的超纯水发生仪器制造，95%乙醇为自制（乙醇为分析纯）。样品制备方法如下：合煎液的制法：使用分析天平称取川芎粉末2.50g，赤芍粉末2.50g，首先使用95%乙醇共50ml浸泡半小时，再分别用95%乙醇50ml与40ml回流提取，提取时间为1小时。提取液合并入氮吹管中，放入氮吹仪中进行氮吹，将浓缩后的样品使用甲醇进行定容，定容体积为25ml。分煎液的制备：使用分析天平称取川芎粉末共2.50g，赤芍粉末共2.50g。使用95%乙醇各50ml分别浸泡半小时，再使用50ml与40ml的95%乙醇分别进行回流提取，提取时间为1小时。提取液合并入氮吹管中，放入氮吹仪中进行氮吹，将浓缩后的样品使用甲醇定容，定容体积为25ml。单煎液的制备：各称取川芎粉末与赤芍粉末各5.00g，使用95%乙醇共50ml浸泡半小时以充分提取，再使用95%乙醇50ml与40ml分别回流提取，提取时间为1小时。将提取液合并至氮吹管中，放入氮吹仪中进行氮吹，并将浓缩后获得的样品使用甲醇进行定容，定容体积为25ml。

　　1.2 色谱条件

　　超高效液相色谱串联质谱仪（Waters公司），包括二元梯度泵、进样器、柱温箱、光电二极管检测器以及工作站；质谱工作站软件（MassLynx v 3.0）；色谱柱为Waters ODS1柱（100m×2.1mm），流动相为乙腈-1.0%乙酸溶液（A-B），流速设定为0.2ml/min，进样量均为10uL，检测波长为254nm。流动相的洗脱顺序依次为：1min：5%A相；2-65min：50%相；66-90min：100%A相。

　　1.3 质谱条件

　　使用Thermo Fisher APCI 4000 Qtrap质谱仪，电离源为APCI，扫描模式为双离子（正、负），分子量范围设定为80-1000，TEM为400℃，辅助气流速为10L/min。

　　2 结果

　　2.1 分析方法的确立

　　本文认为川芎与赤芍合煎液在不同的流动相体积下其色谱分离行为不同，因此将流动相以乙腈-水、乙腈-1.0%乙酸、乙腈-0.5%乙酸分别进行对照试验，最终显示采用乙腈-水作为流动相时，色谱峰分离度较差，重现性亦较差；采用乙腈-0.5%乙酸作为流动相获得的色谱图较乙腈-水更好，但分离度仍不足，精密度也较低。采用乙腈-1.0%乙酸作为流动相时的分离度良好、色谱图显示无杂质峰干扰、峰形良好。因此最终选定乙腈-1.0%乙酸作为流动相。

　　2.2 方法学验证

　　通过对仪器精密度进行考察可得，选取川芎与赤芍合煎液进行进样，连续进样5次，每次进样量为10ul，对每个峰高的精密度进行考评，总共获得14个峰，测得的精密度（RSD）分别为：0.32%、0.51%、0.73%、0.22%、0.68%、0.45%、0.26%、0.33%、0.41%、0.62%、0.28%、0.19%、0.34%、0.50%。精密度均在2%以内，符合相关要求。对重复性进行考察可得，平行提取川芎与赤芍合煎液样品共3份，对峰高的精密度进行考察可得，RSD在0.8%以内，说明重现性好。

　　2.3 峰归属的确立

　　通过对本文色谱行为进行考察可得，60min以后，川芎与赤芍合煎液出现的色谱峰主要为川芎所有，5-59min川芎与赤芍合煎液的色谱峰主要为川芎与赤芍共同所有。对每一个峰进行分析可得川芎的峰为1、3、4、6、12、13、14，赤芍的峰主要为2、5、7、8、9、10、11。

　　2.4 HPLC图谱分析结果

　　本文通过比对川芎赤芍合煎液的紫外谱库，能将单煎液中的色谱峰在合煎液中所处的位置进行确认。赤芍单煎液与川芎单煎液的色谱图中，相应的保留时间里未找到合煎液色谱图中的峰6、峰10、峰13。而通过结合保留时间与UV光谱结果后发现，峰6在赤芍单煎液与川芎单煎液的色谱图中不存在的原因是由于其为共流出峰。

　　2.5 质谱分析结果

　　由于通过保留时间（Tr）与UV光谱并不能对每一个峰的归属进行准确的判断，因此对于不明确的峰需使用质谱进行判断。根据分子量信息与保留时间、质谱其他信息结合考虑后发现，峰10、峰13为川芎与赤芍合煎液的共流出物，且在川芎单煎液与赤芍单煎液图谱中未发现峰10、峰13。综上所述基本可以判断，峰6、峰10以及峰13是川芎在进行合煎时产生的新化合物，因此在色谱图中显示为新峰。且根据Ratio值比对后可得，代表川芎的1、3、4、12、14号峰与代表赤芍的2、6、7、8、9、11号峰在合煎液的谱图中的峰高明显高于单煎液中相应峰的峰高，说明将赤芍与川芎进行配伍使用时，其成分含量发生变化。

　　3 讨论

　　赤芍与川芎均为临床上中医常用的中药，其临床治疗作用各不相同，川芎主要用于治疗淤血阻滞的病症，对于头风、头痛、风湿等疾病的治疗效果良好。而赤芍主要用于治疗闭经、肠风下血、温毒发斑等疾病。据多项文献报道显示，赤芍与川芎在配伍应用后，不仅疗效得到显著增强，还能够获得与单独使用时不同的治疗意义。HPLC-MS法能够在达到良好分离目的的前提下，对中药配伍应用规律进行深层次的研究，通过对成分的保留时间、分子量信息以及UV光谱进行考察，能够比较中药单纯使用与配伍使用时成分的质变与量变。

　　对于色谱定性来说，保留时间是最为重要的一个指标，在对色谱峰进行考察的时候，其保留时间以及峰高需要有着很强的重现性，其中仪器的精密度就起着非常重要的作用。

　　根据本文研究结果显示，川芎与赤芍配伍后所得的合煎液的HPLC谱图上的6号峰、10号峰以及13号峰，在川芎单煎液与赤芍单煎液各自的HPLC谱图上并未得到体现。通过结合分子量、保留时间以及UV光谱图等信息后得知，6号峰、10号峰以及13号峰这三个峰均为新峰，即为川芎与赤芍配伍后所得的新化合物产生的峰。且由于川芎与赤芍在配伍应用后HPLC图谱上显示其有效成分的含量具有明显变化，因此本文认为这是其配伍使用后疗效得到提高的有力证据。本次研究旨在于为以后临床药物配伍的时候提供更加可靠的依据，但是仍然需要不断的研究与攻克，为以后更加准确对进行川芎与赤芍之间的配伍而努力。

　　参考文献

　　[1]肖红斌，梁鑫森，卢佩章.中药复方制剂的分析新方法与应用价值[J].色谱，2010，5(2)：1455-1456.

　　[2]王亚丽，梁逸曾，胡芸，等.联用色谱及多组分光谱相关色谱用于当归补血汤与单味药成分的比较研究[J].高等学校化学学报，2006，2(1)：78-81.

　　徐燕