逍遥丸含药血清依赖雌激素受体促进鼠成骨细胞增殖

　　【摘要】目的：采用中药血清药理学的方法，观察逍遥丸含药血清（XCS）对成骨细胞增殖影响及其是否与雌激素受体相关。方法：常规方法制备XCS和妊马雌酮含药血清（CE）冻存备用，体外培养UMR-106细胞，将细胞分为空白组、空白血清组、CE组、XCS不同浓度组，MTT法检测细胞增殖率，同时观察雌激素受体拮抗剂与细胞共孵育后细胞增殖的变化。结果：与空白血清组相比，XCS四个浓度对UMR-106细胞的增殖有明显促进作用（p<0.05）；但在ICI182780干预下对细胞增殖率则无明显影响。结论：XCS对UMR-106细胞的增殖有明显促进作用，此作用依赖雌激素受体才能发挥。

　　【关键词】逍遥丸含药血清；UMR-106细胞；细胞增殖

　　1材料

　　1.1药物

　　逍遥丸，批号：20031263，湖南九芝堂股份有限公司生产；妊马雌酮（CE），惠氏制药有限公司，批号：J20050119，用蒸馏水配制成浓度28.13μg？mL-1的药液备用；雌激素受体拮抗剂（ICI182780），上海前尘生物科技有限公司，用DMSO配成50mmol？L-1储存。

　　1.2动物

　　12月龄衰老雌性Wistar大鼠，体重240±10g。实验动物由北京维通利华实验动物技术有限公司，清洁级，合格证号SCXK（京）2012-0001。

　　1.3仪器和试剂

　　VictorTMX3酶标仪，美国PekinElmer；Vert.A1倒置显微镜，德国ZeISS；RPMI1640培养基、新生牛血清（DMEM）、双抗、二甲基四氮唑蓝（MTT）、均购自南京建成生物技术有限公司。

　　2方法

　　2.1XCS的制备

　　将Wistar大鼠30只，体重240±10g。妊马雌酮675μg？kg-1？d-1，逍遥丸2.7g？kg-1？d-1，给药体积为2mL/100g，按大鼠体重灌胃相应浓度的药液，每日1次，连续3周。第22日给药后1小时，麻醉后，腹主动脉取血，离心取血清，灭菌后，至-80℃冰箱保存。

　　2.2UMR-106细胞培养与分组

　　UMR-106细胞常规培养，以2.5×103个每孔密度培养48小时。分别加入各浓度含药血清的1640培养液100μL、10%CE、大鼠空白血清或相应体积的培养液，每组均设6个复孔，温育48小时（另设相同组别的细胞与ICI1827801μm？L-1共孵育）。

　　采用MTT法于酶标仪490nm波长处测定各孔的吸光度值，结果用A490表示，计算细胞增殖率。

　　2.3数据处理

　　本实验采用完全随机设计，结果表示为（±S），应用SPSS10.0统计软件进行。多组间比较用单因素方差分析方法，t检验以“P<0.05”表示有显著差异。

　　3结果

　　MTT法检测结果，当细胞培养48小时，XCS（20%、10%、5%）和妊马雌酮含药血清均明显提高UMR-106细胞的增殖率（P<0.05）。细胞在与ICI182780共孵育48h后，与空白组相比较，增殖率未发生明显变化（P>0.05）；与ICI182780未干预相比，细胞增殖率有显著差异（P<0.01）。4讨论

　　现代药理研究表明逍遥丸有类雌激素样作用，通过体外实验研究观察成骨细胞发生相关转录水平基因和表达蛋白的指标评价发现雌激素促进成骨细胞生成，同时也有体内实验证明雌激素促进成骨细胞的发生、分化、增殖和功能。成骨细胞是骨形成的主要功能单位，刺激成骨细胞增殖并促进其分化成熟是防治骨质疏松症的主要方法。本实验在细胞水平上研究了XCS对成骨细胞增殖作用部分指标的影响，初步表明XCS具有一定的促进成骨细胞增殖作用，并提示其可能具有雌激素受体依赖性。但本实验仅为细胞水平的活性初步考察，其他尚需进一步深入研究。

　　参考文献

　　[1]张宁，李会娟，祁永华等.基于中药血清药物化学方法的逍遥散治疗黄褐斑的药效物质基础研究[J].世界科学技术，中医药现代化，2010，12（4）：643.

　　雷霞 孙桂华 刘海洋 张宁

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